核酸染料要怎么用？用的時(shí)候要注意些什么？
點(diǎn)擊次數(shù)：14497 更新時(shí)間：2020-12-15
核酸染料的機(jī)理是通過(guò)靜電吸附與DNA分子結(jié)合，從而大大增加了DNA的發(fā)光。它的熒光信號(hào)強(qiáng)，背景低，不同于強(qiáng)效EB，毒性較低，使用更安全。雙鏈DNA在透射的紫外線下顯示綠色熒光，可用于RNA染色。激發(fā)波長(zhǎng)分別為268m，294mm和491nm，前兩種是紫外光，后者是可見(jiàn)光。發(fā)射波長(zhǎng)在530nm處產(chǎn)生。
核酸染料的使用方法：
1、在微波爐中融化100m瓊脂凝膠溶液（濃度通常為0.8％?2）。
2、加入2-5ul，并輕輕搖動(dòng)以免產(chǎn)生氣泡。
3、冷卻至不燙手時(shí)倒入凝膠，瓊脂糖凝膠*固化后，加載樣品進(jìn)行電泳。
4、電泳完成后，使用可疑的凝膠成像系統(tǒng)或可見(jiàn)光透射儀進(jìn)行觀察。如果您使用可疑的凝膠成像系統(tǒng)拍照，則可以通過(guò)調(diào)節(jié)照明設(shè)備，曝光時(shí)間并選擇合適的光片來(lái)獲得清晰的圖像和低背景的照片。
核酸染料的注意事項(xiàng)：
1、膠水的厚度不應(yīng)超過(guò)0.5cm，膠水太厚會(huì)影響檢測(cè)的靈敏度。
2、瓊脂凝膠的反復(fù)融化可能會(huì)影響核酸檢測(cè)的靈敏度。
3、當(dāng)通過(guò)凝膠電泳回收DNA時(shí)，建議在自然光下進(jìn)行染色和切割DNA譜帶，以避免紫外線和EB對(duì)目標(biāo)DNA的損害，這可以顯著改善分子生物學(xué)的下游水平，例如作為克隆，轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)錄。
4、對(duì)皮膚和眼睛有一定刺激性。操作時(shí)請(qǐng)戴手套。如果不小心觸摸皮膚，則應(yīng)立即清洗并正確處理廢物。
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